汉邦/汉凰科技推出银杏内酯纯化制备技术
背景
银杏内酯是从银杏叶中提取的一类萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏发挥药理作用的关键活性成分，具有抗血小板聚集、改善血液循坏和神经保护等作用。
银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J、M等二萜内酯以及唯一的倍半萜内酯——白果内酯。其分子结构极具特色，拥有一个包含六个五元环（包括一个螺壬烷、一个四氢呋喃环和三个内酯环）的十二碳笼状骨架，并嵌入一个罕见的叔丁基，这种复杂的结构是其生物活性的物质基础。
正是这种独特的结构，赋予了银杏内酯特殊的生理功能。研究表明，银杏内酯是效果优异的血小板活化因子受体拮抗剂。血小板活化因子是体内一种强效的促炎和血栓形成介质，与心脑血管疾病、炎症、哮喘等多种疾病的病理过程密切相关。其中，银杏内酯B的拮抗活性尤为突出，成为药理研究的焦点。此外，研究还发现银杏内酯在抗脑缺血、调节神经递质、抗抑郁甚至逆转药物耐药性等方面展现出巨大潜力，为其在神经系统及心脑血管疾病治疗领域的应用打开了广阔空间。
然而银杏内酯在植物体内含量极低，且多种结构类似物共存，它们的物理化学性质接近，这给单一高纯度单体的获取带来了巨大困难。传统的纯化方法，如溶剂萃取、大孔树脂吸附等，通常只能得到总内酯混合物或进行初步富集，难以满足现代药物研发与生产对成分均一性和纯度的高标准要求。制备液相色谱法的技术发展给银杏内酯的分离纯化带来了新方法。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在银杏内酯分离纯化中的应用。
实验案例
客户提供的银杏内酯粗品，性状为白色粉末；需要制备收集其中的4个目标组分，要求纯化后产品的纯度≥98%，单杂＜1%。
实验人员先对粗品进行检测分析。由于银杏内酯的紫外吸收弱，所以本次实验中主要使用蒸发光散射检测器（ELSD）和示差折光检测器（RID）。
表1.检测方法
| 仪器设备 | NS4201二元液相色谱系统+ELSD |
| 色谱柱 | Hedera ODS-2（4.6×250 mm，5 μm） |
| ELSD条件 | 气体流速：1.6L/min 漂移管温度：60℃ |
| 柱温 | 35℃ |
| 洗脱方法 | 甲醇：四氢呋喃：水=25%：10%：65% |
| 流量 | 1 mL/min |
结果如图1所示，主要目标峰有一定分离度，但还需要进一步优化提高，确保在制备场景下的收率和纯度。
图1.样品检测结果
由于客户要求避免使用毒性溶剂，对流动相体系还需重新筛选；考虑到制备方法需要生产放大，对色谱填料也需要进一步优化选择，且在室温下用等度的流动相是更适合放大制备的。
经过色谱柱和流动相体系的筛选，优化后结果如下。
表2.优化后方法
| 仪器设备 | NS4201二元液相色谱系统+ELSD |
| 色谱柱 | Hedera ODS-2（4.6×250 mm，9 μm） |
| ELSD条件 | 气体流速：1.6L/min 漂移管温度：60℃ |
| 柱温 | 室温 |
| 洗脱方法 | 甲醇：水=28%：72%，等度洗脱 |
| 流量 | 1 mL/min |
结果如图2所示，各色谱峰分离度显著，可以进行后续制备工艺的放大开发。
图2.方法优化结果
参照上述优化后方法，进行实验室制备工艺开发。由于ELSD的流动相流量有限，因此当工艺放大后改用RID进行检测。
表3.实验室制备工艺
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 色谱系统 | NS4201 | NS4210 | ||||
| 检测器 | ELSD | RID | ||||
| 色谱柱 | Hedera ODS-2，9 μm ，4.6×250 mm | Hedera ODS-2,9um,10×250 | Hedera ODS-2，9um，20×250mm | |||
| 检测器条件 | 气体流速：1.6L/min 漂移管温度：60℃ | / | ||||
| 洗脱方法 | 0~35min，28%甲醇:72%水；35~70min，35%甲醇:65%水 | 28%甲醇:72%水 | 26%甲醇:74%水 | 25%甲醇:75%水 | ||
| 流量mL/min | 1 | 3 | 12 | 12 | ||
| 载样量 | 2mg | 5.6mg | 10.3mg | 42mg | 161.5mg | 239mg |
制备工艺开发结果如图3、图4所示。
图3. ELSD制备工艺结果
图4. RID制备工艺结果
对以上制备工艺所收集得到的馏分回收合并，并对产品进行检测，结果：工艺5共收到合格组分152mg，其中目标峰1产品25.8mg，检测纯度99.8%；目标峰2产品62.8mg，纯度99.9%；目标峰3产品37.2mg，纯度99.9%；目标峰4产品26.2mg，纯度99.8%；总体收率94%；
工艺6共收到合格组分203.9mg，其中目标峰1产品30.9mg，纯度99.4%；目标峰2产品91.2mg，纯度99.9%；目标峰3产品51.1mg，纯度99.9%；目标峰4产品30.7mg，纯度99.3%；总体收率85%。
结果均满足客户需求！
本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在银杏内酯纯化中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了较好的分离效果以及制备工艺开发能力，为用户提供纯化工艺的优质解决方案。针对相关需求用户，我们有如下配置推荐，为您的分离纯化工作保驾护航！
表4实验室制备推荐配置
| 设备主机 | NS4210二元制备液相色谱系统 |
| 色谱柱 | Hedera ODS-2，9um，20×250mm |
| 自动进样器 | AS8002半制备型自动进样器 |
| 馏分收集器 | NC6010矩阵式馏分收集器 |
- 可实现无人值守的全自动化制备液相配置
- 适用于天然产物及杂质分离的色谱柱及填料
- 系统具备优秀的线性放大效果
- 方便快捷的色谱工作站，安全可靠的参数监控和安全防护功能
