高压制备液相系统在天然产物—光甘草定的纯化制备中的应用

背景

天然产物（NPs）是从植物、动物、微生物和海洋生物中提取和分离的具有特定活性的次生代谢产物。这些化合物由生物体产生以实现各种不同功能。

光甘草定（Glabridin）作为光果甘草中高价值的黄酮类活性成分，因其卓越的美白、抗氧化及抗炎等功效，已成为医药、化妆品等领域的重要原料之一。然而，其天然含量极低（仅约0.2%），且伴随大量结构相似物（如甘草酸、异甘草素等）和脂溶性杂质的干扰，使得高纯度光甘草定的分离纯化成为技术瓶颈。传统纯化工艺（如溶剂萃取-柱层析联用）虽能实现初步富集，但存在步骤繁琐、有机溶剂消耗量大、回收率低（通常<50%）及环境污染等问题，难以满足规模化生产需求。

高压制备液相色谱凭借其高分辨率、高载样量及自动化优势，逐渐成为光甘草定纯化的主流技术。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在光甘草定的纯化制备中的应用。

实验案例

样品为植物材料的黄酮类提取物，外观呈棕红色粉末，易溶于甲醇、乙醇，具有热不稳定性，在酸性、碱性环境中容易降解。样品中光甘草定的纯度为58%，含量为20%左右，需要通过制备纯化使纯度达到98%以上。

实验人员先需要对不同色谱柱进行筛选，根据经验选取了4款色谱柱，同时按照表1中的方法进行方法摸索进样。

仪器设备	NS4201二元液相色谱系统
色谱柱	某品牌C18色谱柱1（10.0×250mm 10μm）某品牌 C18色谱柱2（10.0×250mm 10μm）某品牌C18色谱柱3（10.0×250mm 10μm）Hedera ODS-2（10.0×250mm 10μm）
检测波长	282nm
流动相	甲醇：水=70：30，等度洗脱
流速	3mL/min
上样量	20μL（1mg/mL）

表1.方法摸索

结果如图1，同时筛选四款色谱柱，对比目标组分色谱峰与其主要后杂之间的分离度见表2，结果Hedera ODS-2色谱柱对目标组分的保留能力最强，且其与主要后杂之间的分离度最大，认定其分离效果最佳，用于后续的工艺优化。

图1.四款色谱柱对样品的筛选进样

色谱柱	与主要后杂分离度
某品牌C18色谱柱1	1.11
某品牌C18色谱柱2	1.04
某品牌C18色谱柱3	1.17
Hedera ODS-2	1.53

表2.目标组分与后杂分离度

确定色谱条件和色谱柱类型后，对载样量进行优化尝试。分别尝试载样量为0.1%、0.3%、0.5%，制备谱图如下：

结果讨论：

经过色谱柱的筛选和制备工艺的优化，按照阈值收集得到目标组分。将纯度检测合格的收集管合并，最终得到如表3的结果，纯度达到目标所需的98%以上。

载样量	馏分纯度	回收率
0.1%	98.04%	95%
0.3%	98.00%	85.5%
0.5%	98.05%	62.92%

表3.不同载样量的制备工艺优化

本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在天然产物光甘草定的纯化制备中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了极佳的分离效果，大大提高了天然产物纯化工作的效率，为用户提供天然产物纯化的优质解决方案。