羊毛甾醇，化学名称为lanosterol，是一种四环三萜类化合物，分子式为C₃₀H₅₀O，为白色无臭粉末。羊毛甾醇主要存在于羊毛脂非皂化物中，而有最新研究发现，植物中也存在羊毛甾醇合酶基因。中国科学院植物研究所漆小泉团队的研究表明，植物羊毛甾醇合酶基因广泛分布于33个科、46个植物物种中，主要存在于双子叶植物中。

在生物合成的途径中，羊毛甾醇是胆固醇生物合成的关键中间体。在动物与真菌中，从2,3-环氧鲨烯生成羊毛甾醇，再进一步合成胆固醇，其在生物体内具有重要的生理功能。作为一种重要的化学合成中间体，羊毛甾醇通常被用于合成其他复杂甾体激素类药物，也可作为合成维生素D及其衍生物的起始原料之一。

羊毛甾醇本身也在多个领域展现出独特的价值。研究表明，它具有抑制白内障形成的特殊能力，能够防止晶状体混浊，甚至逆转已形成的晶体蛋白聚集。在更广泛的应用中，羊毛甾醇已成为化妆品、医药和化工行业中的重要原料。特别是在化妆品领域，羊毛甾醇以其卓越的渗透性、吸水性和润滑性能备受青睐。它主要作为高档化妆品、唇膏、口红等产品的添加剂，因其独特的结构和功能而具有可观的市场价值。

羊毛甾醇的获取主要依赖于天然提取和生物合成两大途径。其天然提取的来源集中于羊毛脂，该途径成本相对低，来源也最广泛，但也容易混入杂质，产物的后处理难度大，不利于后续的高附加值利用。羊毛甾醇的生物合成途径的研究受到广泛的关注，例如上海交通大学谭在高团队首次在大肠杆菌中合成羊毛甾醇。

正是由于羊毛甾醇的来源相对复杂，高效分离出高纯度羊毛甾醇成为了技术链条中的最大挑战。现有的结晶、蒸馏、萃取等技术各具特点，但均面临显著瓶颈。制备液相色谱法因其良好的选择性、高效性、重现性以及易于放大的特点，成为了羊毛甾醇纯化制备的新选择，尤其适用于分离结构相似杂质（如二氢羊毛甾醇），以获得超高纯度的产品。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在羊毛甾醇分离纯化中的应用。

实验案例

客户提供的羊毛甾醇粗品为白色固体，易溶于二氯、四氢呋喃，微溶于乙醇，不溶于水。客户提供的分析谱图显示，目标组分的含量为67%左右。要求纯化后纯度＞99%，单杂＜0.5%。

表1.分析方法

经色谱柱筛选，确定使用Hedera ODS-2进行分析。结果如图1所示，对照客户分析结果，各组分实现基线分离，目标峰峰形良好。

图1.样品分析结果

延续分析方法，考虑到样品易溶于四氢呋喃，使用四氢呋喃+水作为流动相体系。

表2.提高上样量方法

结果如图2所示，可以基线分离，可以继续提高载样量。

图2.提高上样量结果

参照上述方法，将载样量提高3倍进行制备尝试。

表3.提高上样量方法-2

图3. 提高上样量方法结果-2

对以上制备结果中目标峰进行馏分收集，合并后浓缩，对所得馏分进行分析检测，目标组份纯度可达99%以上，单杂＜0.5%，满足要求。

本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在羊毛甾醇纯化中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了较好的分离效果，体现了公司制备工艺开发能力，为用户提供纯化工艺的优质解决方案。针对相关需求用户，我们有如下配置推荐，为您的分离纯化工作保驾护航！

表4实验室推荐配置

• 可实现无人值守的全自动化制备液相配置
• 适用于天然产物或合成产物，及杂质分离的色谱柱及填料
• 系统具备优秀的线性放大效果

方便快捷的色谱工作站，安全可靠的参数监控和安全防护功能

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图3. 在7-X10分析柱上对目标组分（A1）和馏分Fr1~Fr15（B2-P2）进行SFC分析；

条件：流动相A: CO_2，,流动相B：甲醇；梯度：0–20 min, 5 %–65 % B; 检测波长：210 nm；流速：3.0 mL/min；柱温：30–35℃。

在RPLC和SFC中使用7-X10分析柱对目标馏分和15个单独馏分进行分析，色谱图分别见图3 A1-P1和图3 A2-P2。

从图3 A1–P1可以明显看出，7-X10 RPLC的一维制备分离结果中，Fr1、Fr2、Fr3、Fr6、Fr9、Fr12、Fr14和Fr15馏分的谱图均表现出一组未分离色谱峰，表示使用7-X10反相液相色谱对这些馏分的分离存在困难。而在图3 A2-P2中，Fr1、Fr2、Fr3、Fr6、Fr9、Fr12、Fr14和Fr15馏分的谱图显示，使用7-X10 SFC对这些馏分的分离具备更好的潜力。

通过互补机制应用正交分离可以显著提高分离选择性和峰容量，这对于从复杂混合物中分离结构相似的化合物至关重要。为了对这种正交性进行全面的定量评价，基于RPLC和SFC的分析结果，构建了归一化的2D图，该图被划分为15×14个区间，共产生210个网格段，其中数据点占142个区间（如图所示）。根据公式（1）计算，对于7-X10 RPLC和SFC系统，O%的计算值位96.38%。

图4.RPLC和SFC系统中7-X10柱的归一化图；

…………………………………………………………………………………………………（1）

经7-X10 RPLC一维制备分离后，成功地获得了15个不同的级分。必须选择一个能有效证明二维7-X10 RPLC × SFC系统有效性的代表性馏分。值得注意的是，如图3 A1和L1所示，在一维制备过程中，主要化合物有效地分配到级分Fr 11中。它表现出单一主峰的特征。经过彻底的比较分析，最终选择Fr 11作为二维方法应用的最佳代表馏分。因此，将870.8毫克的Fr11重新溶解在3.0 mL的甲醇中，为随后的二维制备做好准备。

选择Fr11进行二维的SFC纯化制备。将之前制备获取的870.8 mg Fr11溶解于3 mL甲醇溶液中。根据之前SFC的分析结果，对色谱条件进行优化，得到以下的结果。

图5. SFC-FRC仪器（A），Fr 11组分样品的优化色谱图（B1），不同上样体积（B2-B5），Fr 11组分样品的第5、10、20和30次制备色谱图（C1-C4），以及Fr 111、Fr 112、Fr 113和Fr 114组分的纯度评估。

条件：等度洗脱：0-45 min，20%甲醇和80%二氧化碳;检测波长：210 nm;流速：3.0 mL/min;柱温：30-35 ℃;收集参数的起始斜率为300 μV/sec，起始阈值为350000μV，结束斜率为− 400 μV/sec，结束阈值为350000μV。

纯度评估条件如下：流动相A：0.1% v/v三氟乙酸的色谱级水溶液；流动相B：甲醇：梯度，0-30 min；15%-95% B；流速，1.0 mL/min；检测波长，210 nm；柱温35 ℃。

由图5可知，得到四种化合物Fr 111、Fr 112、Fr 113和Fr 114，在浓缩干燥后，该纯化过程获得10.10mg的Fr 111组分、6.56mg的Fr 112组分、39.92mg的Fr 113组分和26.60mg的Fr 114组分，总回收率为63.7%。使用HPLC搭配C18-Amide分析柱对所得组分进行分析，如图5 D1-D4所示，四种化合物的纯度均在95%以上。在相同的分析条件下，使用RPLC系统测定四种化合物的保留时间分别为15.130 min、16.088 min、12.217 min和10.453 min，这与在SFC系统（采用7-X10固定相）上的分析结果峰序不同，这可能与C18-Amide固定相上含有的极性酰胺基团有关，使得两种固定相之间产生分离选择性差异。

随后采用了包括ESI-HRMS、¹H NMR和¹³C NMR光谱等分析技术对所得4种化合物进行结构组成的确定。将数据结果与文献记录比较，Fr111, Fr112, Fr113, 和Fr114与muricarpone A，hirsutenone，(5S)−1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)− 5-hydroxyheptan-3-one-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside，以及(5S)− 1,7-bis-(3, 4-dihydroxyphenyl)− 5-hydroxyheptan-3-one-5-O-β-D-glucoside的相关数据表现出高度一致性。

在以上的研究中，研究者使用汉凰科技NS4000系列产品，对草本植物唐古特虎耳草的提取物进行了纯化制备，显示设计了一种植物提取物的预处理技术，有效去除了叶绿素和高脂溶性成分；进一步使用NS4000设备完成了对样品的反相液相色谱制备，获得了15种不同的组分。

参考文献：Jun Dang ^a,*, Yingying Tong ^a,b, Qilan Wang ^a, Gang Li ^b, A.M. Abd El-Aty^c,d. Innovative orthogonal two-dimensional reversed-phase liquid chromatography × supercritical fluid chromatography with a phenyl/ tetrazole stationary phase for the preparative isolation of diarylheptanoids. Journal of Chromatography A. 1726(2024)464950, ISSN 0021-9673, https://doi.org/10.1016/j.chroma.2024.464950

谨此致谢：以上期刊论文的研究对本公司制备液相色谱系统的使用与支持！

汉凰科技NS4000系列高压制备色谱：赋能天然产物分离纯化

1. 应对复杂样品：实现精准的“大海捞针”

依托丰富的天然产物项目经验，利用我们的制备系统（SFC超临界流体色谱、高压制备、连续离交等），搭配柱效30000p/m以上的色谱柱，即使是手性化合物、结构类似物（如皂苷同系物、生物碱异构体）也能实现高效分离，从复杂基质中捕获目标成分，使目标组分纯度达99%以上。

• 攻克微量活性成分：最大化回收率

有超过100种类型色谱柱，批量筛选分离介质，专为捕获微量物质而优化工艺。团队通过优化吸附剂、流动相和梯度程序，发现并获得1μg级的微量成分，提高目标物的回收率达80%以上，确保每一分珍稀提取物物尽其用，提升研发产出的科学和经济价值。

• 打破工艺放大壁垒，降本增效：全自动配置，辅助mg到kg级的平滑放大

系统可配备全自动进样、馏分收集功能，实现实验室无人值守，稳定重现1000次。从小试阶段就着眼于放大生产，确保您的纯化方法能够从实验室到中试制备，再到工业化生产级完美线性放大，方法转移高效无忧。

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神经酸（nervonic acid），早期发现于哺乳动物的神经组织，故得此名。神经酸作为生物膜的重要组成成分，是一种在维持大脑正常功能中不可或缺的物质。它就像是大脑的 “隐形卫士”，默默地守护着大脑的健康，对大脑发育、神经修复以及预防多种脑部疾病等方面都有着重要作用。

从功效上看，神经酸的能力十分强大。对于婴幼儿来说，它是大脑发育的 “催化剂”，能够促进神经细胞的生长和发育；对于中老年人，神经酸又能像一位 “记忆修复师”，增强神经细胞之间的信息传递，有效改善记忆力。此外，当大脑受到如脑外伤、中风等损伤时，神经酸还能化身 “神经修复专家”，促进神经细胞的修复和再生，减轻神经损伤带来的症状，助力患者恢复神经功能。更值得一提的是，神经酸还具有抗氧化作用，能够减少自由基对神经细胞的损伤，从而降低神经退行性疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病等的发生风险。

神经酸凭借其卓越的功效备受青睐。在医药领域，它被视为治疗脑部疾病的重要研究对象，科研人员正不断探索其在治疗老年痴呆、脑中风后遗症等疾病方面的潜力；在保健品市场，含有神经酸的产品成为众多消费者养护大脑的选择，帮助人们在日常生活中补充神经酸，维护大脑健康；在食品行业，一些富含神经酸的功能性食品也逐渐崭露头角，为人们提供一种更为便捷的补充神经酸的方式。

然而，神经酸的获取并非易事。它在自然界中的含量稀少，通常存在于鲨鱼脑、元宝枫籽油、文冠果油等少数来源中，这使得其提取和纯化过程充满挑战，也导致了神经酸的价值居高不下。正因如此，如何高效获得高纯度神经酸，成为了科研人员和生产厂家共同关注的焦点。随着高压制备液相色谱技术的不断发展，为神经酸的分离纯化提供了新的方法，其具有高分离效能、高回收率、操作简便等优点。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在神经酸分离纯化中的应用。

实验案例

客户提供的神经酸粗品，外观为黄色油状液体，要求纯化后产品纯度达99%以上。

实验人员通过标准品与粗品分别进样对照，确定粗品中目标峰位置

表1.检测方法

结果如图1所示，确认目标峰位置。

图1.样品检测结果

（注：红色为标准品，蓝色为粗品）

针对该粗品，进行纯化制备的尝试与方法开发。基于上述检测方法，沿用Nucifera C18H色谱柱进行半制备方法优化。

表2.半制备方法优化1

结果如图2所示，收集58-61.25min馏分进行检测。

图2.色谱柱C18H半制备方法优化

对收集得到的馏分进行检测，结果如图3.

图3.馏分检测结果

目标峰的纯度为91%，还需进一步优化。尝试更换其他类型色谱柱。同时对多种色谱柱进行分离尝试，其中Nucifera C18E可对目标峰实现较好的分离，故用其进行后续工艺开发和模拟制备。

表3.半制备方法优化2

结果如图4所示，不断尝试提高载样量。

图4.色谱柱C18E制备方法优化

对目标峰馏分收集合并后进行检测，结果如图5所示，纯度均达到99%以上。

图5.馏分检测结果

对合并的馏分进行旋蒸、称重，获得合格目标物质重量为24.2mg。

本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在神经酸中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了较好的分离效果以及制备工艺开发能力，为用户提供纯化工艺的优质解决方案。针对相关需求用户，我们有如下配置推荐，为您的分离纯化工作保驾护航！

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银杏内酯是从银杏叶中提取的一类萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏发挥药理作用的关键活性成分，具有抗血小板聚集、改善血液循坏和神经保护等作用。

银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J、M等二萜内酯以及唯一的倍半萜内酯——白果内酯。其分子结构极具特色，拥有一个包含六个五元环（包括一个螺壬烷、一个四氢呋喃环和三个内酯环）的十二碳笼状骨架，并嵌入一个罕见的叔丁基，这种复杂的结构是其生物活性的物质基础。

正是这种独特的结构，赋予了银杏内酯特殊的生理功能。研究表明，银杏内酯是效果优异的血小板活化因子受体拮抗剂。血小板活化因子是体内一种强效的促炎和血栓形成介质，与心脑血管疾病、炎症、哮喘等多种疾病的病理过程密切相关。其中，银杏内酯B的拮抗活性尤为突出，成为药理研究的焦点。此外，研究还发现银杏内酯在抗脑缺血、调节神经递质、抗抑郁甚至逆转药物耐药性等方面展现出巨大潜力，为其在神经系统及心脑血管疾病治疗领域的应用打开了广阔空间。

然而银杏内酯在植物体内含量极低，且多种结构类似物共存，它们的物理化学性质接近，这给单一高纯度单体的获取带来了巨大困难。传统的纯化方法，如溶剂萃取、大孔树脂吸附等，通常只能得到总内酯混合物或进行初步富集，难以满足现代药物研发与生产对成分均一性和纯度的高标准要求。制备液相色谱法的技术发展给银杏内酯的分离纯化带来了新方法。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在银杏内酯分离纯化中的应用。

实验案例

客户提供的银杏内酯粗品，性状为白色粉末；需要制备收集其中的4个目标组分，要求纯化后产品的纯度≥98%，单杂＜1%。

实验人员先对粗品进行检测分析。由于银杏内酯的紫外吸收弱，所以本次实验中主要使用蒸发光散射检测器（ELSD）和示差折光检测器（RID）。

表1.检测方法

结果如图1所示，主要目标峰有一定分离度，但还需要进一步优化提高，确保在制备场景下的收率和纯度。

图1.样品检测结果

由于客户要求避免使用毒性溶剂，对流动相体系还需重新筛选；考虑到制备方法需要生产放大，对色谱填料也需要进一步优化选择，且在室温下用等度的流动相是更适合放大制备的。

经过色谱柱和流动相体系的筛选，优化后结果如下。

表2.优化后方法

结果如图2所示，各色谱峰分离度显著，可以进行后续制备工艺的放大开发。

图2.方法优化结果

参照上述优化后方法，进行实验室制备工艺开发。由于ELSD的流动相流量有限，因此当工艺放大后改用RID进行检测。

表3.实验室制备工艺

制备工艺开发结果如图3、图4所示。

图3. ELSD制备工艺结果

图4. RID制备工艺结果

对以上制备工艺所收集得到的馏分回收合并，并对产品进行检测，结果：工艺5共收到合格组分152mg，其中目标峰1产品25.8mg，检测纯度99.8%；目标峰2产品62.8mg，纯度99.9%；目标峰3产品37.2mg，纯度99.9%；目标峰4产品26.2mg，纯度99.8%；总体收率94%；

工艺6共收到合格组分203.9mg，其中目标峰1产品30.9mg，纯度99.4%；目标峰2产品91.2mg，纯度99.9%；目标峰3产品51.1mg，纯度99.9%；目标峰4产品30.7mg，纯度99.3%；总体收率85%。

结果均满足客户需求！

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如今在天然产物的研究中，分离纯化手段是多种多样的。其中常用的是一维液相色谱法（1D-LC）。而传统的一维液相色谱法经常会受到色谱分离效率和峰容量的显著限制。二维色谱则可以利用不同色谱系统的分离机制的差异性，提高分辨率和峰容量。然而1D-LC/2D-LC的可能会因为固定相被污染，导致柱效受到严重影响，这通常是由于植物提取物样品被直接注射到色谱系统中，样品中的叶绿素等物质吸附在固定相中难以被洗脱。

超临界流体色谱（SFC）由于其利用超临界状态的CO₂作为流动相，而具有多种优点，例如低粘度、高流速下的高效率和环境可持续性。超临界流体技术已应用于天然产物及其异构体的分离，与传统的反相液相色谱（RPLC）相比，由于其独特的选择性，在异构体分离方面表现出独特的优势。这种独特的选择性可能使RPLC×SFC二维体系中存在相当程度的正交性，这可能成为RPLC×SFC二维色谱分离的关键。

基于已有的反相液相色谱和超临界流体色谱（SFC）在天然产物纯化中的应用，研究者旨在开发一种应用于天然产物的分离纯化新技术，即使用离线的反相液相色谱（RPLC）×超临界流体色谱法（SFC），且仅使用7-X10固定相进行天然产物的制备分离。

该研究以一种产于青藏高原地区的多年生草本植物，唐古特虎耳草（Saxifraga tangutica）的地上部分的提取物为研究对象。室温下使用甲醇对样品浸提，提取液通过0.45μm尼龙膜过滤。提取液中含有大量的植物叶绿素，这些叶绿素若是进入硅胶基质的固定相则会吸附其上，导致色谱柱的柱效降低，因此在正式制备前有必要先去除提取液中的叶绿素。

研究者使用自装填的CHP20P中压柱来进行样品提取液的预处理。使用一台色谱泵将样品提取液以30mL/min的流量输送通过中压柱，根据紫外检测器谱图收集流出液。

图1. 汉凰科技制备液相系统+CHP20P 中压柱(A), 唐古特虎耳草甲醇提取液(B), 前处理溶液(C), 紫外色谱图(D), 运载样品溶液部分(E) 和甲醇洗脱部分(F)。
色谱条件: 流动相 A: 唐古特虎耳草甲醇提取液, and B: 甲醇; 梯度: 0–167 min, 100 % A, 167–195 min，100 % B; 检测波长: 210 nm; 流速: 30.0 mL/min.

对比样品的甲醇提取液和经过中压柱后的前处理溶液，其中干物质的含量从4.38 mg/mL降至1.38 mg/mL。这种固体含量的减少是由于叶绿素和高脂溶性成分，被留在了CHP20P中压柱中。除去的干物质重量计算为14.5g，相当于去除率为66.2%。这为后续纯化制备中使用的硅胶基质固定相提供了极大的保护。

样品的正式纯化制备将分为一维、二维两个步骤。

由于目标组分在反相溶剂系统中的溶解度有限，故在一维反相色谱纯化中选择干法上样。将前处理溶液减压浓缩，得到20mL浓缩液；将浓缩液于30g无定形硅胶混合，并在40℃下干燥湿混合物，最终得到干燥的样品，称重为37.4g。

通过调研，研究者选择了7-X10固定相自装填色谱柱（49×460mm，7μm），搭配干法上样，实现一维反相液相色谱制备分离。

图2. 汉凰科技制备液相系统+7-X10反相分离柱(A), 干法上样柱 (A1)，X10分离柱 (A2)，X10固定相结构(A3) 和一维7-X10反相液相制备色谱图(B).

条件: 流动相A:色谱纯水含0.1% v/v三氟乙酸（TFA），流动相B: 甲醇；梯度: 0–120 min,

0 %–100 % B; 检测波长210 nm; 流速: 80.0 mL/min。

根据图2.B，研究者共收集到15个不同馏分，将其全部回收旋干称重后，再重新溶解于甲醇，用于后续的分析和制备。

图3. 在7-X10分析柱上对目标组分（A1）和馏分Fr1~Fr15（B1-P1）进行反相液相色谱分析；

条件：流动相A:纯水中含有0.1 % v/v三氟乙酸（TFA），流动相B：甲醇；梯度: 0–60 min, 0 %–100 % B；检测波长：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱温: 30℃。

在RPLC使用7-X10分析柱对目标馏分和15个单独馏分进行分析，色谱图分别见图3 A1-P1。

从图3 A1–P1可以明显看出，7-X10 RPLC的一维制备分离结果中，Fr1、Fr2、Fr3、Fr6、Fr9、Fr12、Fr14和Fr15馏分的谱图均表现出一组未完全分离的色谱峰，表示使用7-X10反相液相色谱对这些馏分的分离存在困难。

通过互补机制应用正交分离可以显著提高分离选择性和峰容量，这对于从复杂混合物中分离结构相似的化合物至关重要。

那么SFC对上述馏分的分离效果又会如何呢？我们下期分晓。
参考文献：Jun Dang ^a,*, Yingying Tong ^a,b, Qilan Wang ^a, Gang Li ^b, A.M. Abd El-Aty^c,d. Innovative orthogonal two-dimensional reversed-phase liquid chromatography × supercritical fluid chromatography with a phenyl/ tetrazole stationary phase for the preparative isolation of diarylheptanoids. Journal of Chromatography A. 1726(2024)464950, ISSN 0021-9673, https://doi.org/10.1016/j.chroma.2024.464950谨此致谢：以上期刊论文的研究对本公司制备液相色谱系统的使用与支持！

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在天然产物研究与创新药物开发的广阔舞台上，皂苷类化合物始终占据着重要地位。其中，QS-21 作为一种从南美树种 Quillaja saponaria 树皮中提取的高效免疫佐剂皂苷，自其生物活性被发现以来，便成为疫苗佐剂研究领域一颗耀眼的“明星分子”。 QS-21最初由Kensil团队通过反相（RP）色谱从皂皮树树皮提取物中分离获得，因其在分离过程中为第21个色谱组分且具有适宜丰度和可接受毒性，故被命名为“QS-21”。

QS-21结构复杂，属于三萜皂苷，具有独特的双糖链结构。其卓越的免疫增强活性，主要体现在能够强烈刺激机体产生高滴度的抗体反应和强大的细胞免疫应答（特别是Th1型免疫和细胞毒性T淋巴细胞反应）。这使得它从众多佐剂候选物中脱颖而出，已成为人用疫苗佐剂（如已上市的带状疱疹疫苗Shingrix）和多种临床在研治疗性疫苗（如癌症疫苗、HIV疫苗等）的关键组分之一，展现出巨大的临床应用价值与市场潜力。

然而，QS-21的产业化之路并非坦途。其天然来源有限，主要依赖于从智利皂树的树皮中提取，在植物中含量极低，且结构类似物众多，高效、高纯度、规模化的分离纯化是制约其研究与应用的巨大瓶颈。传统的纯化方法，如大孔树脂吸附、硅胶柱层析等，往往存在分辨率低、流程冗长、有机溶剂消耗大、产物纯度与收率难以兼顾等问题，难以满足现代药物研发对于活性成分在纯度、均一性及重现性上的严苛要求。

目前，众多高校、科研院所以及生物技术公司，都在积极探索QS-21的合成生物学（如微生物异源合成）、结构修饰以及更高效的分离制备工艺。尽管其全化学合成已取得突破，但步骤极其繁琐，成本高昂；生物合成路径正在优化，但距离大规模生产尚需时日。因此，从天然原料中高效纯化获取QS-21，仍然是当前满足早期研究、临床前及部分临床阶段需求的重要乃至主要手段，其纯化工艺的先进性直接关系到研发进度与成本。

在这一背景下，现代制备液相色谱技术 以其分离效率、分辨能力、自动化程度以及规模化拓展性的优势，成为攻克QS-21纯化难题的利器。相较于传统方法，采用经过精心优化的制备液相色谱（尤其是反相制备色谱）方案，能够实现对复杂皂苷提取物中QS-21及其类似物的精准“抓取”，在短时间内获得高化学纯度与高光学纯度的目标产物，且工艺稳定、重现性好，为QS-21的活性研究、结构确证、标准品制备乃至小批量临床用药生产提供了可靠、高效的技术平台。

本文将深入探讨QS-21的制备纯化挑战，并重点阐述如何利用先进的制备液相色谱技术，构建从分析方法开发到规模化纯化的完整解决方案，以助力科研与产业同仁加速这一关键佐剂分子的开发与应用进程。

实验案例

客户提供的皂树树皮提取物，易溶于水。分析结果显示，其中QS-21的纯度低于6%。要求纯化后纯度＞95%，收率＞50%。

图1.标准品对照分析结果

考虑到提取物中目标物的含量低，且提取物中含有较多杂质，故设计通过多步纯化实现目标要求。第一步初纯，目标是富集目标组分，除去主要杂质

表1.初纯方法

按照如上初纯方法进行第一步制备，结果如下。

图2.初纯制备谱图

收集馏分，合并浓缩后进行分析。

图3.初纯产品检测结果

如分析结果可见，经过第一步初纯，目标峰的收集纯度为23.66%，计算收率为80%。所得馏分作为样品继续进行第二步纯化。

表2.二纯方法

二纯制备结果如图4所示。

图4.二纯制备谱图

收集框中馏分，合并浓缩后检测

图5.二纯产品检测结果

如分析结果可见，经过第二步纯化，目标峰的收集纯度为43.89%，计算收率为90%。所得馏分作为样品继续进行第三步精纯。

表3.精纯方法

精纯制备结果如图6所示。

图6. 精纯制备谱图

收集框中馏分，合并浓缩后检测

图7. 精纯产品检测结果

如分析结果可见，经过第三步精纯，目标峰的收集纯度＞98%，计算收率为80%。综合三步纯化，整体收率为57.6%，结果满足目标要求。后续在DAC系统上顺利完成工艺放大：使用DAC450完成初纯，DAC300完成二纯，DAC150完成精纯，三步纯化可一次处理20g粗品。

本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在QS-21皂苷纯化中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了较好的分离效果，体现了公司制备工艺开发能力，为用户提供纯化工艺的优质解决方案。针对相关需求用户，我们有如下配置推荐，为您的分离纯化工作保驾护航！

表4实验室推荐配置

• 可实现无人值守的全自动化制备液相配置
• 适用于天然产物或合成产物，及杂质分离的色谱柱及填料
• 系统具备优秀的线性放大效果
• 方便快捷的色谱工作站，安全可靠的参数监控和安全防护功能

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天然产物（NPs）是从植物、动物、微生物和海洋生物中提取和分离的具有特定活性的次生代谢产物。这些化合物由生物体产生以实现各种不同功能。

光甘草定（Glabridin）作为光果甘草中高价值的黄酮类活性成分，因其卓越的美白、抗氧化及抗炎等功效，已成为医药、化妆品等领域的重要原料之一。然而，其天然含量极低（仅约0.2%），且伴随大量结构相似物（如甘草酸、异甘草素等）和脂溶性杂质的干扰，使得高纯度光甘草定的分离纯化成为技术瓶颈。传统纯化工艺（如溶剂萃取-柱层析联用）虽能实现初步富集，但存在步骤繁琐、有机溶剂消耗量大、回收率低（通常<50%）及环境污染等问题，难以满足规模化生产需求。

高压制备液相色谱凭借其高分辨率、高载样量及自动化优势，逐渐成为光甘草定纯化的主流技术。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在光甘草定的纯化制备中的应用。

实验案例

样品为植物材料的黄酮类提取物，外观呈棕红色粉末，易溶于甲醇、乙醇，具有热不稳定性，在酸性、碱性环境中容易降解。样品中光甘草定的纯度为58%，含量为20%左右，需要通过制备纯化使纯度达到98%以上。

实验人员先需要对不同色谱柱进行筛选，根据经验选取了4款色谱柱，同时按照表1中的方法进行方法摸索进样。

表1.方法摸索

结果如图1，同时筛选四款色谱柱，对比目标组分色谱峰与其主要后杂之间的分离度见表2，结果Hedera ODS-2色谱柱对目标组分的保留能力最强，且其与主要后杂之间的分离度最大，认定其分离效果最佳，用于后续的工艺优化。

图1.四款色谱柱对样品的筛选进样

表2.目标组分与后杂分离度

确定色谱条件和色谱柱类型后，对载样量进行优化尝试。分别尝试载样量为0.1%、0.3%、0.5%，制备谱图如下：

结果讨论：

经过色谱柱的筛选和制备工艺的优化，按照阈值收集得到目标组分。将纯度检测合格的收集管合并，最终得到如表3的结果，纯度达到目标所需的98%以上。

表3.不同载样量的制备工艺优化

本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在天然产物光甘草定的纯化制备中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了极佳的分离效果，大大提高了天然产物纯化工作的效率，为用户提供天然产物纯化的优质解决方案。

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在现代药物研发与生产领域，小分子药物杂质的制备与研究在确保药物的安全性、有效性和质量可控性方面具有不可替代的作用。在药物研发和生产过程中，杂质的存在难以避免。杂质通常包括合成副产物、降解产物、起始原料残留、中间体残留等，这些杂质的含量虽低，但对药物的安全性和有效性有着深远的影响。了解杂质的结构与特性有助于优化合成工艺，提高药物的纯度和质量。在药物的临床使用中，杂质的含量是评估药物安全性的重要指标之一，过高含量的杂质可能会引发不良反应，影响患者的治疗效果和安全性。

小分子药物杂质的制备面临着诸多挑战。一方面，杂质的含量通常很低，分离和提取的难度较大，需要高灵敏度和高选择性的分离技术才能实现杂质的富集和纯化。另一方面，杂质的结构和性质往往与药物主体成分相似，增加了分离的难度。

替莫唑胺作为一种口服烷化剂类抗肿瘤药物，为肿瘤治疗开辟了新的途径。近年来，随着高压制备液相色谱技术的不断发展，为替莫唑胺的杂质制备提供了新的思路和方法，其具有高分离效能、高回收率、操作简便等优点。此次我们将与您分享高压制备液相色谱在替莫唑胺的杂质制备中的应用。

实验案例

客户提供样品为替莫唑胺的合成产物，外观为白色粉末状固体，其最大紫外吸收波长为270nm。产物经HPLC检测有杂质峰，需要进行制备获取一定量用于后续结构鉴定。

实验人员称取10mg样品固体，经过前处理后先对样品进行检测分析，用于确定目标杂质的出峰位置。

表1.检测方法

结果如图1所示，确认目标杂质峰的出峰位置。

图1.样品检测结果

针对该目标杂质，进行纯化制备的尝试与方法开发。基于上述检测方法，提高样品浓度为20mg/mL，使用10×250mm、20×250mm和DAC50制备柱逐级进行放大制备尝试，方法分别如下。

表2.制备方法尝试

在上述色谱条件下制备谱图如下，目标杂质峰位置如下面三张谱图所示。

图2. 10mm色谱柱制备结果

图3. 20mm色谱柱制备结果

图4. DAC50柱制备结果

以阈值为条件对上述制备结果进行馏分自动收集，得到馏分溶液，对馏分进行检测。

图5. 馏分初步检测结果

目标杂质在36.6min出峰，纯度为96.31%。由于后续需要对目标杂质进行结构鉴定，故要对馏分进行除盐。

使用低压层析柱+HPLC两步除盐，最终得到目标杂质，对其进行检测，结果如下。

图6. 除盐并浓缩后目标杂质检测结果

所得目标杂质在27.48min出峰，纯度为97.72%。最终得到20mg的目标杂质，可用于后续的结构鉴定和杂质研究。

本案例展示了汉凰科技NS4000系列高压制备液相色谱系统在合成药物替莫唑胺的杂质制备中的典型应用，搭配汉德的反相色谱柱实现了较好的分离效果以及优异的线性放大能力，为用户提供杂质制备的优质解决方案。针对杂质制备的需求用户，我们有如下配置推荐，为您的杂质制备工作保驾护航！

表3.杂质制备推荐配置

• 可实现无人值守的全自动化制备液相配置
• 适用于小分子合成药物及杂质分离的色谱柱及填料
• 系统具备优秀的线性放大效果
• 方便快捷的色谱工作站，安全可靠的参数监控和安全防护功能

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背景

在科研与工业生产的化学分析领域，无紫外吸收样品的分离与检测一直是极具挑战性的难题。传统的检测手段面对这类样品往往束手无策，难以提供准确、高效的分离结果。然而，Flash中压制备技术与ELSD（蒸发光散射检测器）的强强联合，为这一困境带来了完美解决方案，开启了无紫外吸收样品分离纯化的全新篇章。

ELSD检测器的出现，彻底打破了无紫外吸收样品检测的僵局。与传统的紫外检测器依赖化合物的紫外吸收特性不同，ELSD有着截然不同的检测原理。它就像一个敏锐的“物质捕捉器”，样品随流动相进入检测器后，首先被雾化成微小的液滴，接着在加热的环境中，流动相溶剂迅速蒸发，只留下不挥发的溶质颗粒。这些溶质颗粒在强光的照射下，产生散射光，而检测器通过捕捉和分析这些散射光的强度，就能精准地检测到样品的存在和含量。

应用领域

   当Flash中压制备技术与ELSD检测器携手合作，它们的优势得到了最大化的发挥。在天然产物研究领域，许多天然产物的活性成分没有明显的紫外吸收，但却具有重要的药用价值。利用Flash中压制备技术先对天然产物提取物进行高效分离，将复杂的混合物分成多个馏分，然后ELSD检测器对这些馏分进行逐一检测。在研究某种珍稀植物中的活性成分时，通过这种联合应用，成功分离并检测出了多种之前未被发现的无紫外吸收活性成分，为新药研发提供了宝贵的资源。

在有机合成领域，合成反应往往会产生多种副产物，其中不乏无紫外吸收的杂质。借助Flash中压制备与ELSD检测器的组合，科研人员可以快速分离合成产物，并准确检测出其中的杂质，确保合成产物的高纯度。在合成一种新型药物中间体时，通过这种联合方法，不仅高效地分离出了目标产物，还检测到了微量的无紫外吸收杂质，为后续的药物合成提供了质量保障。

应用案例

样品来自某科研团队，样品为某药物中间体，无紫外吸收，传统的检测方法无法满足需求。我们采用了Flash中压制备结合ELSD检测器的方案。

图1 Flash+ELSD设备图

样品进行Flash制备纯化的实验参数为下表所示：

表1 Flash参数

图2 Flash+ELSD分离纯化谱图

样品为无色液体，采用液体进样，经过优化分离条件，选择合适的色谱柱和流动相，最终实验参数如表1所示。成功地将两个中间体分离开来，如图2所示。这一成功案例不仅解决了该科研团队的燃眉之急，也为其他科研人员在面对类似问题时提供了借鉴。

如果你还在为无紫外吸收样品的分离和检测而烦恼，不妨尝试一下Flash中压制备技术与ELSD检测器的组合。我们拥有专业的团队，为您提供全方位的技术支持和解决方案。从仪器的选型、实验条件的优化，到数据分析和结果解读，我们都能为您提供一站式服务。让我们一起携手，突破无紫外吸收样品分析的难关，在科研和生产的道路上迈出更坚实的步伐。

如需进一步了解Intepure 系列产品的详细规格信息,请与我们联系!

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     在有机合成以及药物化学的发展当中,为了加快研发速度,提高实验智能自动化水平, 一直是化学工作者渴望改进和突破的方向｡快速制备液相色谱系统也因此诞生,由于其高 效快速的特点,快速制备液相色谱技术得到了迅猛发展｡近几年被广泛用于药物合成化学 有机合成产物后处理,为了快速纯化目标产物,大多数实验室都配备了快速制备液相色谱 系统｡快速制备液相色谱系统已经在实验室研发当中扮演着不可或缺的角色｡此次我们将 与您分享快速制备液相色谱系统在药物合成中的应用案例。

实验案例

样品来自某医药研究公司,样品为黄色粘稠油状物､易溶于乙酸乙酯､甲醇､乙腈等｡ 首先取少量样品进行HPLC 纯度分析,如图1 所示为粗品HPLC 分析图谱,可知样品纯度 在55%左右,要求纯度达到90%以上｡客户目前方法是用传统玻璃层析柱方式纯化,如图 2 所示,传统玻璃柱的方法耗时约为5h 完成一个样品的纯化｡

图1 粗样的HPLC分析图谱。

图2 传统过柱方法5h完成实验

由于样品的极性较大,汉凰实验人员考虑使用正相硅胶柱来进行分离纯化｡取1g 粗样 用于Flash 制备,色谱柱选用25g 正相硅胶柱,制备实验参数如表1 所示:

表1 正相制备纯化实验参数设置。

结果讨论

图3 为粗样在正相硅胶柱上的制备纯化谱图,按照阈值收集得到目标组分｡取目标组 分进行HPLC 分析,纯化后样品的HPLC 谱图如下图4 所示,样品纯度达91%以上,快速 制备液相色谱系统70 min 完成实验,节省了大量时间和成本,满足客户要求,可以用于客户的进一步研究中｡

图3 粗样在25g正相硅胶柱上的Flash图谱

图4 纯化后样品的HPLC分析图谱

本案例显示出了Intepure S 的强大分离纯化能力,可以大大提高分离纯化效率,尤其适 用于CRO 等公司进行一些药物中间体的分离纯化,大大缩减了科研人员的时间,体现 出更高的工作效率｡

如需进一步了解Intepure S 系列产品的详细规格信息,请与我们联系!

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